Protocole d'ensemencement des boîtes

Protocole à suivre

Préparation de la paillasse et des boîtes

• 1. Mettre la blouse, attacher les cheveux, remonter les manches

  2. Dégager la paillasse autour du bec électrique

  3. Désinfecter la paillasse avec le produit désinfectant (1 psitt) et de l'essuie-tout

  4. Allumer le bec électrique (puissance max)

  5. Attendre 5 minutes pour stériliser l'air autour du bec

  6. Se désinfecter les mains et les avant-bras à l'aide du gel hydroalcoolique

  7. Ecrire sur le dessous des 4 boîtes (coté gélose) : initiales du binôme et la durée d'irradiation par les UV (0, 15, 30 ou 60 s)

  8. Placer le portoir à tube dans la zone stérile

Ensemencement de la boîte t=0 s

• 1. Placer la boite "t=0 s" dans la zone stérile, gélose vers le bas

  2. Ouvrir le tube contenant la suspension S0

  3. Ouvrir le sachet contenant la pipette stérile

  4. Prélever un petit volume de suspension S0 avec la pipette

  5. Retirer le couvercle à l'aide de votre main gauche (ou droite pour les gauchers) et le garder en main dans la zone stérile

  6. Déposer au centre de la gélose 2 gouttes (= 100 µL) de la suspension de levures S0

  7. Refermer la boîte et le tube S0

  8. Ouvrir le sachet avec l'étaleur sans l'abimer. Attention de ne pas toucher la partie "râteau". Conserver le sachet.

  9. Rouvrir la boîte en gardant le couvercle dans la main 

  10. Étaler avec l'étaleur la suspension délicatement sur la gélose en parcourant toute la surface de la boite (faire des cercles)

  11. Refermer la boîte et la mettre de coté

  12. Placer la pipette et l'étaleur usagés dans le pot "poubelle javel"

Ensemencement des boîtes t=15 s ; 30 s ; 60s

• 1. Ouvrir le tube contenant la suspension S.

  2. Répétez l'opération avec un nouvel étaleur pour les boîtes 15, 30 et 60 s mais en utilisant cette fois ci la suspension S

Attention ne pas poser l'étaleur sur la paillasse et toujours le conserver dans la zone stérile ; utiliser le même étaleur pour ces 3 boîtes.