Embedded Files
Précautions
Avant de commencer, mettre BLOUSE, GANTS, LUNETTES DE PROTECTION et attacher les CHEVEUX
Préparation
Marquage des tubes à essai
A l'aide du gros marqueur, marquer 6 tubes à essais
2 tubes dans lesquels vous réaliserez les réactions enzymatiques :
"Am" dans lequel vous testerez l'hydrolyse de l'amidon
"Ag"dans lequel vous testerez l'hydrolyse de l'agarose
2 tubes dans lesquels vous réaliserez les test à la liqueur de Fehling pour le temps t=0 (condition initiale):
"Am T0" dans lequel vous testerez l'hydrolyse de l'amidon
"Ag T0"dans lequel vous testerez l'hydrolyse de l'agarose
2 tubes dans lesquels vous réaliserez les test à la liqueur de Fehling pour le temps final (condition finale):
"Am Tf" dans lequel vous testerez l'hydrolyse de l'amidon
"Ag Tf"dans lequel vous testerez l'hydrolyse de l'agarose
Marquage des pipettes
A l'aide du gros marqueur, marquer le haut des 4 pipettes
1 pipette de 10 mL : "Am" pour prélever l'amidon
1 pipette de 10 mL : "Ag" pour prélever l'agarose
1 pipette de 5 mL : " Enz (Am)" pour prélever l'enzyme
1 pipette de 5 mL : " Enz (Ag)" pour prélever l'enzyme
Marquage de la plaque de coloration
Placer la plaque blanche de coloration à plat devant vous en "format portrait". Puis marquer à l'aide du petit marqueur
Les 2 premières colonnes
"Am"
"Ag"
Les 4 lignes
0 min
3 min
6 min
9 min
Préliminaire
A l'aide de la pipette de 10 mL marquée "Am", transférer 10 mL de la solution d'amidon dans le tube à essai marqué "Am"
A l'aide de la pipette de 10 mL marquée "Ag", transférer 10 mL de la solution d'agarose dans le tube à essai marqué "Ag"
Placer dans chacun de ces deux tubes à essai une grande pipette en plastique
Test de l'hydrolyse de l'amidon
ATTENTION : Il faut manipuler rapidement pour réaliser les deux tests (Liqueur de Fehling et test à l'eau iodée). Commencez par bien lire les consignes et visualiser ce que vous aurez à faire avant de vous lancer.
Démarrage de la réaction sur l'amidon
A l'aide la pipette de 5 mL "Enz (Am)", transférer 3 mL de la solution d'enzyme dans le tube à essai"Am"
A l'aide de la grande pipette en plastique contenue dans le tube à essai, homogénéiser 2 fois (rapidement)
A l'aide de la grande pipette en plastique déposer environ 0.5 mL de la solution dans le puits de "Am", "0 min" de la plaque de coloration
A l'aide la pipette de 5 mL "Enz (Am)", transférer 4 mL de la solution du tube "Am" dans le tube "Am T0"
A l'aide la petite pipette en plastique, transférer 1 mL de Liqueur de Fehling dans le tube "Am T0"
Placer immédiatement
le tube "Am T0" dans le bain-marie à 80 °C pour réaliser le test à la liqueur de Fehling
le tube "Am" dans le bain-marie à 37 °C
Lancer immédiatement le chronomètre !!
Déposer immédiatement 1 goutte de Lugol dans le puits "Am", "0 min" de la plaque de coloration
A 2'30", sortir le tube "Am T0" du bain marie et passer immédiatement à la suite
Prélèvements et test au Lugol
Au temps t =3 min ; 6 min ; 9 min
A l'aide de la grande pipette en plastique déposer environ 0.5 mL de la solution du tube "Am" dans le puits "Am", "3 min" ou " 6 min" etc... de la plaque de coloration
Déposer immédiatement 1 goutte de Lugol dans ce puits
Prélèvements final et test à la Liqueur de Fehling
Au temps t =9 min
A l'aide de la pipette"Enz (Am)" transférer 4 mL de la solution du tube "Am"dans le tube "Am Tf"
A l'aide la petite pipette en plastique, transférer 1 mL de Liqueur de Fehling dans le tube "Am Tf"
Placer immédiatement le tube "Am Tf" dans le bain-marie à 80 °C pour réaliser le test à la liqueur de Fehling
Relancer le chronomètre
A 2'30", sortir le tube "Am Tf" du bain-marie.
Test de l'hydrolyse de l'agarose
Démarrage de la réaction sur l'agarose
A l'aide la pipette de 5 mL "Enz (Ag)", transférer 3 mL de la solution d'enzyme dans le tube à essai"Ag"
A l'aide de la grande pipette en plastique contenue dans le tube à essai, homogénéiser 2 fois (rapidement)
A l'aide de la grande pipette en plastique déposer environ 0.5 mL de la solution dans le puits de "Ag", "0 min" de la plaque de coloration
A l'aide la pipette de 5 mL "Enz (Ag)", transférer 4 mL de la solution du tube "Ag" dans le tube "Ag T0"
A l'aide la petite pipette en plastique, transférer 1 mL de Liqueur de Fehling dans le tube "Am T0"
Placer immédiatement
le tube "Ag T0" dans le bain-marie à 80 °C pour réaliser le test à la liqueur de Fehling
le tube "Ag" dans le bain-marie à 37 °C
Lancer immédiatement le chronomètre !!
Déposer immédiatement 8 gouttes de Lugol dans le puits "Ag", "0 min" de la plaque de coloration
A 2'30", sortir le tube "Ag T0" du bain marie et passer immédiatement à la suite
Prélèvements et test au Lugol
Au temps t =3 min ; 6 min ; 9 min
A l'aide de la grande pipette en plastique déposer environ 0.5 mL de la solution du tube "Ag" dans le puits "Ag", "3 min" ou " 6 min" etc... de la plaque de coloration
Déposer immédiatement 8 gouttes de Lugol dans ce puits
Prélèvements final et test à la Liqueur de Fehling
Au temps t =9 min
A l'aide de la pipette"Enz (Ag)" transférer 4 mL de la solution du tube "Ag"dans le tube "Ag Tf"
A l'aide la petite pipette en plastique, transférer 1 mL de Liqueur de Fehling dans le tube "Ag Tf"
Placer immédiatement le tube "Ag Tf" dans le bain-marie à 80 °C pour réaliser le test à la liqueur de Fehling
Relancer le chronomètre
A 2'30", sortir le tube "Ag Tf" du bain marie et passer immédiatement à la suite
Google Sites
Report abuse