Doc. 6 - Protocole ELISA

Chaque membre du binôme réalise intégralement la manipulation.

Le port des équipements de sécurité est obligatoire (blouse, gants, lunette de protection)

1. Distribuer à l'aide de la micropipette 80 µL de chacune de 4 solutions à tester (T-, T+, S1, S2) dans 4 cupules différentes sans toucher le fond ni les bords !

   1. • ATTENTION : Changez bien de cône après chaque dépôt pour éviter les contaminations

      • ATTENTION : Repérez et notez de quel coté vous placez l'ergot ("la petite poignée")

2. Lancer le chronomètre

3. Laisser incuber 15 minutes.

4. Vider les cupules dans l'évier en les retournant d'un mouvement sec et précis

1. A l'aide de la pipette de 1 mL, remplir les 4 cupules au goutte à goutte, presque jusqu'en haut avec la solution de lavage (SL)

   1. • ATTENTION : ne pas toucher le fond ou les bords ou le contenu de la cupule avec le cône

      • Veillez à ce qu'aucune goutte ne passe d'une cupule à l'autre

2. Vider les cupules dans l'évier en les retournant d'un mouvement sec et précis

3. Répétez l'opération de lavage 2 fois (-> Total : 3 lavages)

1. A l'aide de la micro-pipette, distribuer 80 µL de solution de l'anticorps de détection (AD) dans chacune des 4 cupules

2. Lancer le chronomètre

3. Laisser incuber 15 minutes

4. Vider les cupules dans l'évier en les retournant d'un mouvement sec et précis

1. A l'aide de la pipette de 1 mL, remplir les 4 cupules au goutte à goutte, presque jusqu'en haut avec la solution de lavage (SL)

   1. • ATTENTION : ne pas toucher le fond ou les bords ou le contenu de le cupule

      • Veillez à ce qu'aucune goutte ne passe d'une cupule à l'autre

2. Vider les cupules dans l'évier en les retournant d'un mouvement sec et précis

3. Répétez l'opération de lavage 2 fois (-> Total : 3 lavages)

1. Retournez la barrette et l'appliquer délicatement sur un papier essuie-tout pour absorber les dernières gouttes de la solution de lavage

2. Distribuer 80 µL de solution de révélation (SR) dans chacune des 4 cupules

   1. • ATTENTION : la distribution doit se faire rapidement car la réaction chimique est rapide... et il s'agit ensuite de comparer les couleurs

      • Veillez à ne pas toucher les cupules avec le cône lors de la distribution

3. Lancer immédiatement le chronomètre

4. Observez le résultat après 2 minutes maximum.

5. Notez le résultat, analysez et concluez.